A hepatitis C a Flaviviridae HCV vírus által okozott májfertőzés, amely egy vagy több RNS-molekulából áll. Általában egy sor diagnosztikai intézkedést hajtanak végre a hepatitis C megállapítására egy betegben. A PCR olyan elemzés, amely pontosan megerősíti a diagnózist. Gyakran az orvosok vonják le a következtetést, amikor a betegnél már megjelennek a betegség első jelei.
Mi az a hepatitis C
A vérrel vagy szexuális érintkezéssel terjedő vírusfertőzés által okozott májkárosodást az orvostudomány hepatitis C-nek nevezi. A kórokozó a Flaviviridae családba tartozó, nem sejtes fertőző ágensek RNS-tartalmú vírusa. A fertőzés hosszú ideig a szervezetben maradhat anélkül, hogy megmutatkozna. Ezért csak akkor tekinthető indokoltnak (diagnózisként) a hepatitis C, ha egy mikroorganizmust PCR RNS RNS-t használó vérvizsgálattal mutatnak ki.
A flavivírus nem termelődik mesterségesen növesztett izolált sejtekben. A szaporodási folyamat során a fertőző ágens immunológiailag eltérő módosulásokat hoz létre. Ezek a tényezők megakadályozzák, hogy a szervezet adjonmegfelelő védekező válasz, és a szakértők nehezen tudnak hatékony vakcinát kifejleszteni.
A vírus parenterálisan terjed. A fertőzéshez elegendő mennyiségben kell bejutnia közvetlenül a véráramba.
Milyen vizsgálatokat végeznek hepatitis C-re?
A máj vírusos patológiáit laboratóriumi vizsgálatokkal diagnosztizálják. A hepatitis C klinikai vizsgálatait a páciens bioanyagában, főként a vérben lévő idegen és veszélyes antigének vagy fehérjevegyületek (antitestek) vizsgálatával végzik.
- Enzimatikus immunoassay (ELISA). A módszer alapja az lgM antitestek kimutatása a vérben. Az immunglobulin a legnagyobbnak számít, és pentamer. Ez a limfociták elsődleges védekező válaszában nyilvánul meg egy ismeretlen idegen anyagra.
- Radioimmunoassay (RIA) – az lgM immunglobulin mennyiségi meghatározása a jód jelölt radioaktív izotópjával.
- Hepatitis C PCR-je – a vírus RNS meghatározása a bioanyagban (vér). Ez az elemzés megbízhatóan megerősíti a diagnózist.
Az IgG-teszt nem megbízható. A vérszérumban való jelenléte nemcsak egy flavivírus jelenlétére utalhat, hanem egy másik múltbéli fertőzésre is, amely ugyanazt a kórokozót hordozza.
Mi határozza meg a PCR-elemzést
A polimeráz láncreakció (PCR) bizonyos kórokozókra specifikus DNS-régiók azonosításán alapul kutatási anyagmintákban (hám, vér). Az elemzés lehetővé teszi a patogén legkisebb szervezetek (vírusok) azonosítását RNS-ük vagy DNS-ük biológiai anyagban történő kimutatásával.
Laboratóriumi eljárás az antitestek kimutatására A hepatitis C PCR-t 3 szakaszban hajtják végre:
- Válassza ki. A vizsgált bioanyagot megtisztítják a szennyeződésektől, és a DNS-t a kromatográfiás oszlop mozgófázisában nyerik ki.
- Erősítés. Az elemzés az eszköz-termosztát ciklusban történik. A kémcsöveket bizonyos ciklikussággal melegíti és hűti. Egy vizsgálat során legfeljebb 35 ciklust végeznek. Az eredmény elegendő számú DNS-fragmens a kórokozó kimutatásához, azonosításához és értékeléséhez.
- Elektroforézis. A kapott fragmentumokat különböző agaróztelítettségű gélbe helyezzük, és elektroforézist hajtunk végre. A kapott elektroferogramot számítógépen elemzik.
Nemcsak a standard PCR-vizsgálatot használják, hanem a valós idejű PCR-elemzést is. Ez valós idejű diagnosztika. A módszer lehetővé teszi a kvalitatív és kvantitatív elemzést, amely lehetővé teszi a betegség kialakulásának és dinamikájának azonosítását, valamint a patológia eredetének okának megszüntetésére irányuló terápia felírását. A valós idejű PCR-t a fertőző ágensek tiszta tenyészetének meghatározására is használják (genotipizálás).
Hogyan történik a polimeráz láncreakció teszt?
A diagnózishoz bármilyen emberi biológiai folyadék használható. A hepatitis C vizsgálatához használt bioanyag általában vér.
A diagnosztikai mintavétel az eljárási szakaszban történikhivatal. Vérvételhez használjon eldobható kémcsöveket olyan anyaggal, amely gátolja a véralvadást. A fertőző ágensek terjedésének megakadályozására irányuló tevékenységek segítenek elkerülni egy másik mikroorganizmus-törzs kívülről való bejutását.
A hepatitis C PCR-hez vért veszünk reggel, éhgyomorra. A mintát azonnal elküldik a laboratóriumba. A bioanyag tárolása +4 és +8 Celsius fok közötti hőmérsékleten megengedett. A tárolóedények fel vannak címkézve és útmutatásokkal vannak ellátva. A teszteredmények 48 órán belül elérhetők, néha hamarabb.
PCR-típusok
A polimeráz láncreakció alkalmazási köre meglehetősen széles. A fertőző szakemberek PCR segítségével határozzák meg a hepatitis B-t, a vérszívó rovarok által terjesztett betegségeket, az AIDS-et, a tuberkulózist. Az onkológiában ezzel a módszerrel a daganatsejteket korai stádiumban észlelik.
Körülbelül tizennégy típusú elemzés létezik. Az egyik vagy másik típus alkalmazása az elemzések terjedelmétől és végeredményétől függ. A PCR bizonyos típusai nélkülözhetetlenek, ha az eredményre 20 percen belül szükség van.
A hepatitis C diagnosztizálására 3 típusú polimeráz láncreakciót alkalmaznak:
- A minőségi értékelés lehet pozitív, jelezve fertőzés jelenlétét a szervezetben, vagy negatív, ami flavivírus hiányát jelzi.
- Valós idejű PCR (kvantitatív elemzés) - meghatározza a kórokozó kvantitatív RNS-ét NE/ml-ben.
- A genotipizálás egy olyan elemzés, amely felfedi a vírus típusát (genotípusát).
A betegség pontos azonosításához és meghatározásához, majd amindhárom típusú vizsgálatot használják az optimális terápia felírására.
Kvalitatív polimeráz láncreakció elemzés
Az elemzés kötelező mindenki számára, aki olyan ELISA-vizsgálattal rendelkezik, amely HCV elleni antitesteket mutatott ki. A hepatitis C kvalitatív PCR-je a standard érzékenységi teszt. A módszer csak kimutatásra irányul, más anyagok számlálása vagy izolálása nem történik.
Az antitestek kimutatására speciális tesztrendszereket használnak, amelyek érzékenységi küszöbértéke legalább 50 NE/ml. Ha antitesteket észlelnek, más tisztázó vizsgálatokat írnak elő. Ha az eredmény negatív, további vizsgálatra nem kerül sor.
Egyes esetekben a hamis negatív eredmény oka lehet a nem hozzáértő laboratóriumi személyzet vagy a rossz minőségű reagensek. Biztosításnál jobb, ha máshol végezzük el az elemzést.
Kvantitatív PCR
A módszert a flavivírusok számának közvetlen tanulmányozására használják egy reakcióciklusban. A pontos méréshez hibridizációhoz használt DNS-fragmenseket vagy fluoreszcensen jelölt primereket használnak. A SYBL Green festék használatával gazdaságos érzékelési lehetőség van. A festék beékelődik egy kis barázdába a DNS-ben, és lézerrel besugározva kék színűvé válik.
A koncentrációt a készülék-erősítő határozza meg digitális egyenértékben. Az értékek laboratóriumonként kissé eltérhetnek, ezért össze kell őket hasonlítani a referenciaértékekkel.
Kvantitatív PCRA hepatitis C segít kiválasztani a gyógyszerek optimális adagját és meghatározni a terápia időtartamát. A vizsgálat gyakorisága a betegség stádiumától, a genotípus típusától és az előírt kezelési módtól függ.
Genotípus meghatározása
A hepatitis C vírus genetikai felépítése változó. Számos módosítás lehetetlenné teszi a vakcina létrehozását, és bonyolítja a terápiát is. Összesen 11 genotípust és 100 altípust azonosítottak és rögzítettek. A volt Szovjetunió országaiban a hepatitis C-vel fertőzött személyeknél a PCR elsősorban az 1b és 3 genotípust mutatja ki.
Bármelyik genotípus jelenlétében a cirrhosis vagy a májrák felléphet. Ezért olyan fontos, hogy időben észleljük a vírust.
Egyes betegek számára bizonyos, a HCV elleni küzdelemre tervezett gyógyszerek mérgezőek. A genotipizálás lehetővé teszi a fehérje típusának meghatározását és hatékony gyógyszer felírását.
A tipizálási tesztek eredményeiben van egy kis latin betűs szám, amely a vírus genotípusát jelzi. Ha a HCV-t észlelik, de nem típusozzák, ez azt jelenti, hogy a személy genotípusa nem jellemző egy bizonyos földrajzi területre.
Elemzési eredmények
Az orvos az eredmények megfejtésével foglalkozik. Csak több vizsgálatból származó adatok (az anamnézissel és vizsgálattal együtt) adhatnak átfogó valós képet a kórelőzményről.
- Egészséges emberben a bioanyag minőségi reakciójának vizsgálata nem mutat ki semmit. Ha a „detected” érték szerepel, a fertőzés megerősítést nyer, és a betegtovábbi diagnózisra van szükség, majd kezelésre.
- A fertőző ágensek számának meghatározása lehetővé teszi a szervezet vírusterhelésének felmérését. Normális esetben a hepatitis C kvantitatív PCR nem mutatja ki a kórokozót. A 810^5-ig terjedő mutató alacsony terhelésnek minősül, és megfelelő terápiával garantálja a kedvező eredményt. A magasabb értékek alapos kivizsgálást és a hosszú távú terápia meghatározását igénylik, melynek pozitív eredményét senki sem tudja garantálni.
- A pozitív genotipizálási eredmények jelzik, hogy melyik genotípust ismerik fel. A negatív eredmény vagy flavivírus hiányát jelzi, vagy olyan genotípus jelenlétét, amely nem jellemző erre a régióra.
Mit jelez a pozitív PCR-teszt
Minden súlyos betegség átfogó diagnózist igényel. A pozitív hepatitis C PCR megerősíti a diagnózist, de jóslatok csak további laboratóriumi és műszeres vizsgálatok után adhatók.
A vírus kimutatása nem ad teljes képet a patológiáról. Meg kell határozni annak típusát és természetét, meg kell határozni, hogyan hat a májra és más szervekre. A HCV korai felismerése gyakran kedvező terápiás eredménnyel jár.
Negatív PCR pozitív ELISA-val
A májkárosodásra jellemző tünetek megfigyelésekor nagy a valószínűsége annak, hogy a fertőzés már bejutott a szervezetbe. Ezért kapcsolatba kell lépnie egy hepatológussal vagy egy fertőző betegség specialistával. Az interjúk során a szakember anamnézist gyűjt és előírja a szükséges vizsgálatot.
Haa hepatitis C PCR vizsgálati eredményei negatívak, az enzim immunoassay pozitív, ez a flavivírus elleni antitestek jelenlétét jelzi a vérben. Ez általában akkor történik, amikor a fertőzés kis mennyiségben bejut a szervezetbe, így az immunrendszer magától megbirkózott vele. De az ilyen embereket továbbra is fertőzöttnek tekintik, és 6 havonta meg kell vizsgálniuk őket. Ha ilyen vizsgálati eredmények esetén egy személytől megtagadják az ingyenes orvosi vizsgálatot, jobb, ha térítés ellenében PCR-t készítenek az egészség megőrzése érdekében, és ha az eredmények pozitívak, forduljon szakemberhez a diagnózis és a kezelés érdekében.
A módszer előnyei és hátrányai
A hepatitis C diagnózisának felállításakor a PCR-nek számos előnye van:
- A kórokozó korai felismerése.
- A vírus pontos meghatározása.
- A diagnosztika hatékonysága.
- Minimális hibaarány.
- Nagy érzékenység.
A módszer hátrányai:
- Az elemzés magas költsége. A vizsgálathoz drága berendezésekre, reagensekre és magasan képzett egészségügyi személyzetre van szükség. Mindez együtt jelentős összeget tesz ki.
- Szigorú követelmények a bioanyag szállítására vonatkozóan.
Májgyulladás kezelése
A hepatitis C vírus PCR-analízise alapvetőnek tekinthető a diagnózis szempontjából, de nem végleges. Ahhoz, hogy a terápia eredményes legyen, számos további laboratóriumi és műszeres vizsgálatra van szükség. Miután átment mindendiagnosztikai intézkedések az orvos által előírt kezelést:
- 5. diétát írnak elő.
- Az alkohol teljes mértékben kizárt.
- Interferon és ribavirin együttes fogadása 25 napig.
- Májvédők „Essentiale”, „Karsil”, „Phosphogliv” tanfolyamai.
- Speciális esetekben diszkrét plazmaferézist használnak.
A hepatológus által felírt gyógyszereket rendszeresen, az adagolás megváltoztatása nélkül használják. A gyógyszerek szedésének időtartamát az orvos határozza meg a kontrollvizsgálatok elvégzése után. A terápia befejezése után félévente fel kell keresnie az orvost.
A PCR-diagnosztika lehetővé teszi a hepatitis C kórokozójának korai szakaszában történő azonosítását. Ez hozzájárul a terápia hatékonyságához és a betegség olyan veszélyes formáiba való átmenetének megelőzéséhez, mint a cirrhosis és a hepatocellularis carcinoma.
