A közelmúltban egy megbízható, rendkívül érzékeny és gyors módszert fejlesztettek ki különféle emberi fertőző betegségek diagnosztizálására. Ezt a módszert "PCR-analízisnek" nevezik. Mi ez, mi a lényege, milyen mikroorganizmusokat tárhat fel és hogyan kell helyesen szedni, cikkünkben eláruljuk.
Felfedezési előzmények
A polimeráz láncreakció (PCR) módszerét Kary Mullis amerikai tudós találta fel 1983-ban. A diagnosztikai módszert kezdetben a Cetus Corporation szabadalmaztatta, amelyben a megalkotója is dolgozott. 1992-ben azonban minden jogot és szabadalmat eladtak a Hoffman-La Roche-nak. Ezek után kiderült, hogy párhuzamosan végeztek hasonló vizsgálatokat, amelyeket más amerikai biológusok is rögzítettek, például Alice Chen, David Edgar, John Trell. 1980-ban A. Slyusarenko, A. Kaledin és S. Gorodetsky szovjet tudósok is foglalkoztak ezzel a problémával. Ezért lehetetlen volt meghatározni a szerzői jog kizárólagos jogosultját. Számos kiemelkedő biokémikus bizonyos mértékben hozzájárult a polimeráz láncreakciós technika kifejlesztéséhez, és szabadalmaztatta innovációit. Jelenleg az elemzésA PCR-t mindenhol speciálisan felszerelt laboratóriumokban végzik.
A PCR diagnosztikai módszer lényege
PCR elemzés: mi ez és hogyan működik? A módszer lényege, hogy mesterséges körülmények között, speciális DNS-polimeráz enzim segítségével növeljük egy bizonyos mikrobiális környezet térfogatát. Ehhez a meglévő DNS-anyagot sokszorosára szaporítják. Így patogén mikroorganizmus jelenlétében a mintában a biokémiai laboratóriumi manipulációk következtében megnő annak mennyisége, és nem lesz nehéz mikroszkóp alatt kimutatni a baktériumot.
Hogyan történik az anyagkutatás?
Az elemzéshez szükséges:
- DNS-mátrix;
- alapozók, amelyek egy darab anyag végeit összekötik;
- hőálló DNS-polimeráz enzim;
- vegyszerek, amelyek az enzimek megfelelő működését biztosítják;
- pufferoldat szükséges a DNS-anyag növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges feltételek megteremtéséhez.
A PCR végrehajtásához 25-30 ismétlést kell végrehajtani, amely három szakaszból áll: denaturáció, lágyítás és elongáció.
A polimer láncreakció elemzéséhez egy speciális eszközt használnak - egy erősítőt. A modern berendezések lehetővé teszik a fűtési és hűtőcsövek szükséges programjának beállítását a diagnosztika során előforduló hibák kiküszöbölése érdekében.
Hol használják a diagnosztikát?
A polimer láncreakciós módszert az orvostudomány különböző területein alkalmazzák:
- kriminalistákolyan genetikai anyagokat azonosít, mint a haj, nyál vagy vér;
- PCR vérvizsgálat segít a genotipizálásban, például egy bizonyos gyógyszerre adott egyéni, genetikailag inherens reakció kimutatására;
- ezt a módszert használva az emberek közötti családi kötelékek meglétének megállapítására;
- A legnépszerűbb PCR-módszer az orvosi diagnosztikában a különböző fertőző betegségek meghatározására.
Milyen fertőzéseket mutat ki a PCR?
Tehát az orvostudomány régóta és sikeresen alkalmazza a PCR-elemzést. Mi az, már tudjuk. És milyen kórokozókat lehet vele kimutatni? A következő fertőző betegségeket diagnosztizálják PCR módszerrel:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplazmózis;
- candidiasis;
- chlamydia;
- mikoplazmózis;
- gardnerellosis;
- fertőző mononukleózis;
- trichomoniasis;
- papillomavírus fertőzés;
- tuberkulózis;
- 1. és 2. típusú herpesz fertőzés;
- helicobacteriosis;
- cytomegalovírus;
- diftéria;
- szalmonellózis;
- HIV fertőzés.
A PCR-módszereket a rák diagnosztizálására is alkalmazzák.
A módszer előnyei
A PCR diagnosztikának számos előnye van:
- Magas érzékenység. Még csak néhány mikroorganizmus-DNS molekula jelenlétében is a PCR-elemzés meghatározza a fertőzés jelenlétét. A módszer segít a krónikus és lappangó betegségekben. Gyakran ilyen esetekben a mikroorganizmusegyébként megművelhetetlen.
- Minden anyag alkalmas kutatásra, például nyál, vér, nemi szervek váladéka, haj, hámsejtek. A leggyakoribb a vér és az urogenitális kenet elemzése a PCR-hez.
- Nincs szükség hosszú távú termésre. Az automatizált diagnosztikai folyamat lehetővé teszi, hogy 4-5 óra elteltével megkapja a vizsgálat eredményeit.
- A módszer majdnem 100%-ban megbízható. Csak elszigetelt eseteket jegyeztek fel hamis negatív eredményekkel.
- A kórokozók többféle típusának azonosítása egyetlen anyagmintából. Ez nemcsak felgyorsítja a betegség diagnosztizálásának folyamatát, hanem jelentősen csökkenti az anyagköltségeket is. Gyakran az orvos átfogó PCR-elemzést ír elő. A hat kórokozó meghatározásából álló vizsgálat ára körülbelül 1500 rubel.
Javaslatok az elemzésre való felkészüléshez
Annak érdekében, hogy az eredmények megbízhatóak legyenek a PCR-vizsgálat során, el kell végeznie a tesztet, követve a diagnózisra való előzetes felkészüléshez szükséges ajánlásokat:
- A nyáladás előtt 4 órával a mintavétel előtt tartózkodnia kell az étkezéstől és a gyógyszerszedéstől. Közvetlenül az eljárás előtt öblítse ki a száját forr alt vízzel.
- A fenti szabályokat az arc belső felületéről történő mintavétel során is be kell tartani. Öblítés után ajánlatos enyhe bőrmasszázst végezni, hogy kiemelje a mirigy váladékát.
- A vizeletet általában otthon gyűjtik össze. Ehhez alapos WC-t kell végezninemi szervek. Gyűjtsön össze 50-60 ml vizeletet egy steril műanyag edénybe. Az anyag tisztaságának biztosítása érdekében nőknek ajánlott tampont behelyezni a hüvelybe, férfiaknak pedig a bőrredőt lehetőleg visszahúzni. Ne adakozzon a menstruáció alatt.
- Sperma adományozásához a mintavétel előtt 3 napig tartózkodnia kell a nemi érintkezéstől. Az orvosok nem tanácsolják a szauna látogatását és a forró fürdőt, az alkoholt és a fűszeres ételeket. A vizsgálat előtt 3 órával tartózkodnia kell a vizeléstől.
- Az urogenitális kenet vételéhez, például, ha PCR-tesztet végeznek chlamydia miatt, a nőknek és a férfiaknak egyaránt javasolt 3 nap szexuális pihenés. Az elemzés előtt 2 héttel nem szabad antibakteriális gyógyszereket bevenni. Egy hétig abba kell hagynia az intim gélek, kenőcsök, hüvelykúpok használatát, az öblítést. 3 órával a vizsgálat előtt tartózkodnia kell a vizeléstől. Menstruáció alatt mintavétel nem történik, csak 3 nappal a vérfolyás megszűnése után lehet urogenitális kenetet venni.
PCR terhesség alatt
A babavárás időszakában számos szexuális úton terjedő fertőzés rendkívül veszélyes a magzat normális fejlődésére. Az STD-k méhen belüli növekedési retardációt, vetélést vagy koraszülést, a gyermek veleszületett fejlődési rendellenességeit okozhatják. Ezért rendkívül fontos a PCR vizsgálat elvégzése a terhesség korai szakaszában. Az elemzést regisztrációkor kell átadni - legfeljebb 12 hétig.
Az anyagot speciális kefével a méhnyakcsatornából veszik. Az eljárás fájdalommentes és nem jelent veszélyt a babára. Általában a terhesség alatt a chlamydia elemzését PCR-módszerrel, valamint az ureaplazmózist, a mikoplazmózist, a citomegalovírust, a herpeszt, a papillomavírust vizsgálják. Az ilyen vizsgálati komplexumot PCR-6-nak nevezik.
PCR a HIV diagnózisához
Mivel a polimeráz láncreakciós módszer nagyon érzékeny a szervezetben bekövetkezett változásokra és a diagnózis körülményeire, számos tényező befolyásolhatja az eredményt. Ezért a HIV-fertőzés PCR-analízise nem megbízható módszer, hatékonysága 96-98%. Az esetek fennmaradó 2-4%-ában a teszt hamis pozitív eredményt ad.
De bizonyos helyzetekben a HIV PCR diagnosztika nélkülözhetetlen. Általában azoknak adják, akiknek álnegatív ELISA-eredménye van. Az ilyen mutatók azt jelzik, hogy egy személyben még nem alakultak ki antitestek a vírus ellen, és nem mutathatók ki számuk többszörös növekedése nélkül. Pontosan ez érhető el PCR vérvizsgálattal.
Ezek a diagnosztikák a HIV-pozitív anyától született első életévüket betöltő gyermekeknél is szükségesek. Ez a módszer az egyetlen módja annak, hogy megbízhatóan meghatározzuk a gyermek állapotát.
PCR a hepatitis diagnosztizálására
A polimeráz láncreakciós módszer lehetővé teszi a hepatitis A, B, C vírus DNS-ének kimutatását jóval a fertőzés elleni antitestek képződése vagy a betegség tüneteinek megjelenése előtt. A hepatitis C PCR-analízise különösen hatékony, mivel az esetek 85% -ában ez a betegség tünetmentes és nemaz időben történő kezelés a krónikus stádiumba lép.
A kórokozó időben történő felismerése segít elkerülni a szövődményeket és a hosszú távú kezelést.
Átfogó PCR-vizsgálat
Komplex PCR-elemzés: mi ez? Ez egy polimer láncreakciós módszerrel végzett vizsgálat, amely többféle fertőzés egyidejű meghatározását foglalja magában: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovírus, ureaplasma urealiticum, 1. és 2. típusú herpesz, gonorrhoea, papillomavírus. Az ilyen diagnosztika ára 2000 és 3500 rubel között mozog. a klinikától, a felhasznált anyagoktól és berendezésektől, valamint az elemzés típusától függően: kvalitatív vagy kvantitatív. Mi szükséges az Ön esetében - az orvos dönti el. Egyes esetekben elegendő a kórokozó jelenlétének meghatározása, másokban, például HIV-fertőzés esetén, a kvantitatív titer fontos szerepet játszik. A fenti kórokozók mindegyikének diagnosztizálása esetén a vizsgálatot "PCR-12 elemzésnek" nevezik.
Elemzési eredmények átirata
A PCR-elemzés megfejtése nem nehéz. A mutatónak csak 2 skálája van - "pozitív eredmény" és "negatív eredmény". Ha kórokozót észlelnek, az orvosok 99%-os biztonsággal megerősíthetik a betegség jelenlétét, és megkezdhetik a beteg kezelését. A fertőzés meghatározására szolgáló kvantitatív módszerrel a megfelelő oszlop jelzi a kimutatott baktériumok számszerű mutatóját. Csak orvos tudja meghatározni a betegség mértékét és előírni a szükséges kezelést.
Egyes esetekben, például a HIV-fertőzés PCR-rel történő meghatározásakor, negatív eredménnyel, további vizsgálatok elvégzése válik szükségessé a kapott mutatók megerősítésére.
Hol lehet tesztelni?
Hol kell PCR-tesztet venni: állami klinikán vagy magánlaboratóriumban? Sajnos az önkormányzati egészségügyi intézményekben a felszerelések és módszerek gyakran elavultak. Ezért jobb, ha előnyben részesítjük a modern berendezésekkel és magasan képzett személyzettel rendelkező magánlaboratóriumokat. Ráadásul egy magánklinikán sokkal gyorsabban lesz eredmény.
Moszkvában számos magánlaboratórium kínál PCR-elemzést különféle fertőzésekre. Például az olyan klinikákon, mint a Vita, a Complex Clinic, a Happy Family, az Uro-Pro, PCR-elemzést végeznek. A vizsgálat ára 200 rubeltől kezdődik. egy kórokozó azonosítására.
Az a következtetés vonható le, hogy a fertőző betegségek PCR-vizsgálata a legtöbb esetben gyors és megbízható módszer a kórokozó kimutatására a szervezetben a fertőzés korai szakaszában. Ennek ellenére bizonyos esetekben érdemes más diagnosztikai módszereket választani. Egy ilyen vizsgálat szükségességét csak szakember tudja megállapítani. A PCR elemzés megfejtése is professzionális megközelítést igényel. Kövesse orvosa tanácsát, és ne végezzen olyan vizsgálatokat, amelyekre nincs szüksége.
