A WHO statisztikái szerint az elmúlt 40 évben 25 millió ember h alt meg AIDS-ben. Ennek a fertőzésnek a kára óriási. Kiderült, hogy a legtöbb fertőzött Afrikában van, ahonnan a fertőzés származott. A HIV-vel a betegség diagnózisa különösen fontossá válik. Igaz, a HIV-re még nincs gyógymód, de a korai kezelés meghosszabbíthatja a beteg életét és javíthatja a minőségét.
HIV-fertőzés diagnózisa
A HIV-fertőzés különböző szakaszaiban a következő módszerekkel határozható meg:
- ELISA – enzim immunoassay.
- Western blot.
- PCR - polimeráz láncreakció.
- Gyorstesztek.
A PCR-módszert Kary Mullis amerikai biokémikus fejlesztette ki, aki 1983-ban Nobel-díjat kapott érte. Ma ezt a módszert az orvostudományban az összes fertőzés diagnosztizálásában vezetőnek tekintik pontossága és információtartalma miatt. A HIV sem kivétel e tekintetben.
Az elemzés lényege
Minden élő sejt tartalmaz RNS-t és DNS-t. Ezek a nukleinsavak képesek önmásolódásra és önreplikációra. Minden fertőzés esetében egyediek a DNS-fragmensek. NÁL NÉLa biológiai folyadékokban ezek a nukleinsav-fragmensek keringenek. Elfogják és felismerik őket egy speciális berendezés - a reaktor. Ez a módszer alapja. A laboráns megszámolja ezeket a töredékeket. A retrovírus HIV RNS-ét monitorozzák. A PCR még a vírusrészecskék egyetlen másolata esetén is képes kimutatni és megszámolni azokat.
Tesztfolyadékként leggyakrabban vénás vért használnak. A módszer speciális komponensei a vírusrészecskékhez kötődnek és kimutathatóvá teszik azokat, mert a talált fragmentumok megsokszorozódnak.
HIV esetében a vírus jelenlétének eredményét jóval a klinika megjelenése előtt meg lehet szerezni. Ezért a PCR nagy érzékenysége miatt olyan magas diagnosztikai értékkel rendelkezik. A PCR óriási előnye a módszer sokoldalúsága. A fertőzés inkubációs ideje a PCR számára nem akadály.
Kutatási költség
A PCR módszer meglehetősen drága. Ez az egyik nagy hátránya. Ehhez a legmodernebb berendezésekre és magasan képzett laboránsra van szükség. A fentiekre tekintettel kistelepüléseken nem végeznek PCR diagnosztikát. Kivizsgálást csak erre szakosodott nagy klinikákon végezhet el.
A HIV-DNS-vizsgálat költsége a moszkvai klinikákon 2800 rubeltől kezdődik, a vírusterhelést (a vírus RNS-ét a plazmában) PCR-rel határozzák meg - 8800 rubeltől, a proteázgátlókkal szembeni HIV-rezisztenciát pedig 16 500 rubeltől. Mint látható, az árak meglehetősen magasak. A PCR az MHI szabályzata értelmében ingyenesen elvégezhető az állami klinikákon. Fontos,hogy az eljárás névtelenül is elvégezhető. Az anyakönyvben a páciens kap egy számot, amely alapján megtudhatja az eredményt. A modern orvosi központokban az ügyfelek személyes fiókjai vannak, ahol ezeket az adatokat beírják.
Kutatási célok
A HIV PCR diagnosztikáját ilyen esetekben írják elő:
- Fertőzés kimutatása beteg anyától vagy hordozótól született gyermeknél a méhen belüli fertőzés meghatározásához.
- Ha az ELISA megkérdőjelezhető eredményt adott (ebben az esetben a HIV PCR segít a végső diagnózis felállításában).
- A szervezetben lévő vírus mennyiségi tartalmának kimutatására.
- Pozitív immunblottal kiegészítik egymást PCR-rel.
- A donorok tesztelése.
- A HIV korai diagnosztizálásához.
- A hatékonyság és az ART elleni rezisztencia meghatározása.
Ennek az elemzésnek az az előnye, hogy a HIV PCR-t még egy év alatti gyermekeknél is el lehet végezni.
A kutatást gyakran nem az elsődleges diagnózis érdekében végzik, hanem már a kezelés folyamatában. Az elsődleges diagnosztika szerológiai vizsgálatok (meghatározzák a HIV-ellenes antitestek szintjét). Ha megismétlődik az álpozitív eredmény, ez alacsony vírusterheléssel járhat.
A PCR akkor diagnosztizálja a HIV-t, amikor még nincs ellenanyag. Az ELISA módszer ebben az esetben nem ad választ.
És a HIV PCR már pozitív lesz. A HIV ezen időszakának tünetei azonban nem specifikusak. A pácienst először hosszú ideig és sikertelenül kezelik az ARVI-vel egy általános orvos. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a HIV diagnózisa csak azA PCR-t nem helyezik el, más átfogó teszteken kell átmenni. A PCR módszer gyakrabban segít a nehéz esetekben.
Felkészülés az elemzésre
A HIV PCR-vizsgálata előtt, 2 nappal a vizsgálat előtt, ne egyen zsíros ételeket, alkoholt. Az is jobb, ha nem erőlködünk lelkileg és fizikailag. Ha a betegnek immunstimulációs kúrát írnak fel, azt 2 héttel az elemzés előtt abba kell hagyni.
A vért legjobb reggel venni. A test egyéb biológiai folyadékai (sperma, hüvelyváladék) is vizsgálhatók, de a vér a legjobb anyag. A nyálat, verejtéket, vizeletet és könnyeket nem használjuk fel, mivel ezekben minimális a vírustartalom.
A PCR előnyei a HIV ellen
A módszer előnyei a téves pozitív eredmény rendkívül alacsony valószínűsége, a reakció egyetemessége a test bármely biológiai folyadékára. Az elemzés széles skálával rendelkezik:
- Egy vérvétel felhasználható különböző fertőzések kimutatására.
- Sürgős a technika, másnapra kész is az eredmény.
- A magabiztosság 85 és 98% között van.
- A HIV jelenléte a fertőzés után 10-14 nappal megállapítható (egyelőre még nincsenek antitestek).
- Nincs korhatár, születéstől kezdve azonnal elvégezhető.
A módszer hátrányai
A PCR hátrányai a következők:
- Elemzés költsége.
- Kifinomult orvosi felszerelést igényel.
- Magasan képzett laboráns és orvos szükséges,átvevő elemzés.
- A reakció nagyon érzékeny, így a hiba akár 20% is lehet.
- Hamis pozitív eredményt eredményezhet, ha a betegnek autoimmun folyamatai, onkológiája vagy krónikus fertőzései vannak.
- A laboratórium helyiségeinek különleges tisztasága szükséges, mert a vírus a levegőből is bejuthat az elemzésbe. Akkor az eredmény rossz lesz.
A PCR-t végző laboratóriumok számára a diagnosztika minőségének javítása érdekében speciális szigorú intézkedéseket dolgoztak ki a SanPiN rendszer szerint a belső ellenőrzés érdekében. Ezenkívül be kell tartani az ezzel a technikával végzett munka minden szabályát:
- A kémcsöveken található információk szigorú betartása kötelező.
- Vérmintavétel előtt nézze meg újra, és győződjön meg arról, hogy az elemzés ütemezett.
- A nővérnek megfelelően kell felcímkéznie a csöveket.
- A laboratóriumi asszisztensnek megfelelően kell végrehajtania a bioanyaggal végzett összes manipulációt a keresztszennyeződés elkerülése érdekében.
- A tesztrendszernek kiváló minőségűnek kell lennie.
Csak ha ezek a feltételek teljesülnek, a válaszban szereplő hiba csak az epizódok körülbelül 2%-a lehet.
Elemzés időtartama
Sokan érdeklődnek az iránt, hogy meddig lesz kész a HIV PCR-re. A diagnózis nem tart tovább 8 óránál. A páciens már másnap választ kaphat. Az expressz tesztelés 2 órán belül megtörténik.
PCR megbízhatóság
Sok előnye ellenére a PCR nem tekinthető ideális diagnosztikai módszernek. Esetben felveszik vele a kapcsolatotszűrővizsgálatok elvégzésének szükségessége a HIV jelenlétére a szervezetben.
Mikor vesznek vért elemzéshez?
Mennyi ideig kell szedni a PCR-t HIV esetén? Megbízható eredmény már vérvételkor is elérhető az állítólagos fertőzés után 4-4 nappal. 2 hét elteltével a HIV-fertőzés megbízhatósága 98%, 5 napos időtartammal pedig 80%. A HIV PCR negatív eredményének jelenléte megbízható lesz, de az abszolút pontos eredmény érdekében ELISA-t is végeznek.
Az ELISA-elemzés csak akkor lesz hatásos, ha vannak a vírus ellen antitestek, ez az idő 1-3 hónaptól hat hónapig tarthat. Mivel az ELISA nagyobb valószínűséget ad (98% -99,9%), a PCR nem nevezhető 100%-os megerősítő tesztnek a HIV fertőzés jelenlétére. Másrészt azonban ez az egyetlen technika, amelyben nem kell megvárni az antitestek megjelenését.
HIV esetén a PCR információkkal szolgálhat az ART hatékonyságáról, a HIV-betegség stádiumáról és a VN-ek számáról (a HIV szervezetben való jelenlétének kvantitatív értékelése). Ez megmutatja a változás súlyosságát és mértékét.
A HIV PCR-vizsgálata akkor is szükséges, ha a vérben antitestek vannak, de ezek jelenléte nem jelzi a HIV-fertőzés klinikai megbízhatóságát.
Nem csak fertőzésre és alkalmi szexre tesztelték őket. Egyéb alkalmak:
- Terhesség tervezése.
- Közelgő művelet.
- Alkalmi szex.
- Egyes szakmákban megkövetelik ezt a tesztet a munkába álláshoz (tanárok, orvosok és egyéb egészségügyi személyzet).
- Foglyok.
- TBC-s betegek.
- A rendkívüli helyzetekkel foglalkozó minisztérium és a rendőrség munkatársai.
- Egzotikus országokból érkezett vakációból (ha biztos akar lenni abban, hogy nincs fertőzés).
- Prostituáltak.
- Külföldi diákok.
- Drogok.
A betegeknél bizonyos tünetek kikényszeríthetik a HIV-teszt elvégzését:
- Hirtelen fogyás.
- 3 hétnél tovább tartó hasmenés
- Indokolatlanul magas hőmérséklet hosszú ideig.
- Duzzadt nyirokcsomók.
- Tüdőgyulladás, candidiasis stb. megmagyarázhatatlan oka.
Az elemzés megfejtése a kezelőorvos kiváltsága, nem a laboráns.
PCR vagy ELISA, melyik a jobb?
Amikor a HIV-vírus RNS-ének PCR-diagnózisát mind minőségileg, mind mennyiségileg kimutatják. Ez az elemzés egyértelműen azonosít egy specifikus kórokozót, még akkor is, ha több keresztreagáló kórokozó létezik. A biológiai anyag akár szárított formában is használható. Hátránya a PCR nagy érzékenysége, amikor a műszereken vagy a kémcsőben már kis mennyiségű idegen DNS jelenléte is fals pozitív eredményt adhat.
Az ELISA feladata és lehetősége a retrovírus elleni antitestek jelenlétének meghatározása. Bár a pontossága 99%, nem alkalmazható a korai szakaszban.
Kvalitatív HIV-teszt
A HIV kiváló minőségű PCR-je meghatározza a vírus jelenlétét a szervezetben. Az eredmények ebben az esetben így néznek ki: pozitív, hamis pozitív, negatív. Ez a tanulmány azonban nem ad információt a retrovírus mennyiségéről. Egy ilyen kvalitatív elemzésnem megfelelő, ha a HIV-fertőzést más módon már kimutatták a szervezetben.
A kezelés hatékonyságát jó minőségű PCR-rel nem lehet ellenőrizni.
HIV mennyiségi meghatározása
Csak HIV-fertőzöttek végzik el, hogy megszámolják a vírus RNS másolatainak számát egy biológiai termékben.
Egy ilyen vizsgálat célja a folyamatban lévő kezelés nyomon követése és a vírus azzal szembeni rezisztenciájának meghatározása. A vírusellenes terápiát az ilyen számításokban nem vakon írja elő az orvos, így hatékonyabb lesz. A HIV-fertőzés kvantitatív PCR-jét sokkal gyakrabban végzik el. Ez az elemzés a vér másolataként jelenik meg.
Milyen eredményeket lehet adni:
- A vírus RNS hiányzik vagy nagyon kicsi (körülbelül 20 kópia/ml). Nem biztos a diagnózis.
- 20 - 10-től 6. fokú másolatig / ml - a diagnózis megbízható.
- Több mint 106 példány/ml – magas VN.
A laboratóriumok valós idejű PCR-tesztet tudnak végezni HIV-fertőzésre. Ez magában foglalja a PCR-termékek felhalmozódásának megfigyelését és számszerű értékelését az eredmények automatikus rögzítésével.
