A baktériumok tanulmányozása nagy gyakorlati jelentőséggel bír az emberek számára. A mai napig nagyszámú prokariótát fedeztek fel, amelyek patogenitásukban, elterjedési területükben, alakjukban, méretükben, flagellák számában és egyéb paramétereikben különböznek egymástól. Ennek a törzsnek a részletes tanulmányozására bakteriológiai kutatási módszert alkalmaznak.
Milyen módszerek vannak a baktériumsejtek elemzésére?
A baktériumok kórokozóinak meghatározásához a tenyészetet különféle módokon vizsgálják. Köztük:
1. Bakterioszkópos módszer.
2. Bakteriológiai módszer.
3. Biológiai módszer.
A bakterioszkópos és bakteriológiai kutatási módszerek közvetlenül a prokarióta sejtekkel végzett munkán alapulnak, amikor biológiai elemzésre van szükség az ilyen sejtek kísérleti állatok élő szervezetére gyakorolt hatásának vizsgálatához. A betegség bizonyos jeleinek megnyilvánulási fokától függően a tudós elkészíthetikövetkeztetést levonni a kórokozó baktériumok jelenlétéről vagy hiányáról a mintában, valamint természetes módon szaporítani őket az állat szervezetében, hogy megkapják a tenyészetet és felhasználják más munkákban.
A bakteriológiai kutatási módszer különbözik a bakterioszkópiástól. Az elsőben az élő prokarióták speciálisan előkészített tenyészetét használják az elemzéshez, míg a másodikban az elh alt vagy élő sejtekkel dolgoznak egy tárgylemezen.
A bakteriológiai kutatási módszer szakaszai. Mikrobiológia
A baktériumtenyészet tulajdonságainak tanulmányozásának elve hasznos lehet mind a mikrobiológusok számára, akik a prokarióta sejtek tanulmányozását tűzték ki célul, mind a laboratóriumi szakemberek számára, akiknek feladata a baktériumok patogenitásának vagy nem patogenitásának megállapítása, ill. majd diagnosztizálja a beteget.
A baktériumok vizsgálatának módszere három szakaszra oszlik:
1. Baktériumok izolálása az eredeti mintából.
2. Baktériumok vetése és tiszta kultúra termesztése, tulajdonságainak tanulmányozása.
3. A baktériumsejtek részletes tanulmányozása.
Első szakasz
A mintát vagy kenetet a táptalaj szabad felületéről vagy a páciensről veszik. Így sokféle baktériumból "koktélt" kapunk, amelyeket táptalajra kell vetni. Néha lehetségessé válik a szükséges baktériumok azonnali izolálása, ismerve a szervezetben elterjedt gócukat.
Két vagy három nap elteltével kiválasztják a kívánt telepeket, ésPetri-csészék szilárd táptalajra vetik steril hurok segítségével. Sok laboratórium dolgozik kémcsövekkel, amelyek szilárd vagy folyékony tápközeget tartalmazhatnak. Így történik a mikrobiológiai kutatás bakteriológiai módszere.
Második szakasz
Az egyes baktériumkolóniák kinyerése után közvetlen makro- és mikroanalízist végeznek. A telepek összes paraméterét megmérjük, mindegyik színét és alakját meghatározzuk. Nem ritka, hogy egy Petri-csészén, majd a kiindulási anyagban számolják a telepeket. Ez fontos a patogén baktériumok elemzésében, amelyek száma a betegség mértékétől függ.
A kutatás bakteriológiai módszere, melynek 2. szakasza az egyes mikroorganizmus-kolóniák vizsgálata, összekapcsolható a baktériumok elemzésére szolgáló biológiai módszerrel. Az ebben a szakaszban végzett munka másik célja az alapanyag mennyiségének növelése. Ezt meg lehet tenni táptalajon, vagy végezhet kísérletet in vivo élő kísérleti szervezeteken. A kórokozó baktériumok elszaporodnak, és ennek eredményeként a vér több millió prokarióta sejtet tartalmaz. A levett vérből könnyen elkészíthető a baktériumok számára szükséges munkaanyag.
Harmadik szakasz
A vizsgálat legfontosabb része a baktériumtenyészet morfológiai, biokémiai, toxigén és antigén tulajdonságainak meghatározása. A munkát tápközegen előtisztított tenyészetekkel, valamint (gyakran festett) készítménnyel végezzük mikroszkóp alatt.
Tulajdonjog beállításapatogén vagy opportunista baktériumok egyik vagy másik szisztematikus csoportjába, valamint azok gyógyszerekkel szembeni rezisztenciájának meghatározása lehetővé teszi a bakteriológiai kutatási módszert. 3. szakasz - antibiotikumok, azaz a baktériumsejtek viselkedésének elemzése a környezetben lévő gyógyszertartalom körülményei között.
Egy tenyészet antibiotikum-rezisztenciájának vizsgálata nagy gyakorlati jelentőséggel bír, amikor egy adott beteg számára szükséges, és ami a legfontosabb, hatékony gyógyszereket kell felírni. Ebben segíthet a bakteriológiai kutatási módszer.
Mi az a növekedési táptalaj?
A fejlődéshez és szaporodáshoz a baktériumoknak előre elkészített tápközegben kell lenniük. Állaguk szerint lehetnek folyékonyak vagy szilárdak, származásuk szerint pedig növényi vagy állati.
Alapvető médiakövetelmények:
1. Sterilitás.
2. Maximális átlátszóság.
3. A savasság, az ozmózisnyomás, a vízaktivitás és egyéb biológiai értékek optimális mutatói.
Izolált telepek beszerzése
1. Drygalsky módszer. Abból áll, hogy a baktériumhurokra különféle típusú mikroorganizmusokkal kenetet visznek fel. Ezt a hurkot az első Petri-csészén egy tápközeggel vezetjük végig. Továbbá, a hurok megváltoztatása nélkül, a maradékanyag módszerét a második és harmadik Petri-csészéken hajtják végre. Tehát a kolónia utolsó mintáin a baktériumok nem lesznek túl sűrűn beoltva, ezáltal leegyszerűsítve a munkához szükségesek megtalálását.baktériumok.
2. Koch módszer. Megolvadt tápközeggel ellátott kémcsöveket használ. Ott egy hurkot vagy pipettát helyeznek el baktériumkenettel, majd a kémcső tartalmát egy speciális lemezre öntik. Az agar (vagy zselatin) egy idő után megszilárdul, vastagságában könnyű megtalálni a kívánt sejttelepeket. Fontos, hogy a munka megkezdése előtt hígítsa fel a kémcsövekben lévő baktériumkeveréket, hogy a mikroorganizmusok koncentrációja ne legyen túl magas.
A bakteriológiai kutatási módszer, amelynek szakaszai a kívánt baktériumtenyészet izolálásán alapulnak, nem nélkülözheti ezt a két módszert az izolált telepek megtalálására.
Antibiogram
Vizuálisan a baktériumok gyógyszerre adott reakciója két gyakorlati szempontból is megfigyelhető:
1. Papírlemez módszer.
2. Baktériumok és antibiotikumok tenyésztése folyékony közegben.
A papírkorongos módszerhez olyan mikroorganizmusok tenyészetére van szükség, amelyeket szilárd táptalajon tenyésztettek. Egy ilyen közegre tegyen néhány antibiotikummal átitatott, lekerekített papírdarabot. Ha a gyógyszer sikeresen megbirkózik a bakteriális sejtek semlegesítésével, akkor az ilyen kezelés után kolóniáktól mentes terület lesz. Ha az antibiotikumra adott reakció negatív, a baktériumok túlélik.
Folyékony tápközeg használata esetén először készítsen elő több kémcsövet különböző hígítású baktériumkultúrával. Ezekbe a kémcsövekbe antibiotikumot adnak, és a nap folyamán megfigyelik az anyag és a mikroorganizmusok közötti kölcsönhatás folyamatát. Ennek eredményeként kiváló minőségű antibiogramot kapunk, amely szerint lehetségesítélje meg a gyógyszer hatékonyságát egy adott termény esetében.
Az elemzés fő feladatai
Itt felsoroljuk a bakteriológiai kutatási módszer céljait és szakaszait.
1. Szerezze meg a kiindulási anyagot, amelyet a baktériumkolóniák izolálására használunk. Ez lehet bármilyen tárgy felületéről, nyálkahártyáról vagy emberi szerv üregéről származó kenet, vérvétel.
2. Tenyésztés szilárd táptalajon. 24-48 óra elteltével különböző típusú baktériumok telepei találhatók a Petri-csészén. Morfológiai és/vagy biokémiai szempontok alapján kiválasztjuk a kívántat, és azzal folytatjuk a további munkát.
3. Az így létrejövő kultúra szaporítása. A bakteriológiai kutatási módszer a baktériumtenyészetek számának növelésének mechanikai vagy biológiai módszerén alapulhat. Az első esetben a munka szilárd vagy folyékony tápközeggel történik, amelyen a baktériumok termosztátban szaporodnak és új kolóniákat képeznek. A biológiai módszer természetes körülményeket igényel a baktériumok számának növeléséhez, így itt a kísérleti állat mikroorganizmusokkal fertőződik meg. Néhány nap múlva sok prokarióta megtalálható a vérmintában vagy a kenetben.
4. Munka a tisztított kultúrával. A baktériumok szisztematikus helyzetének, valamint a kórokozókhoz való tartozásuk meghatározásához a sejtek alapos elemzését kell elvégezni a morfológiai és biokémiai jellemzők szerint. A mikroorganizmusok patogén csoportjainak tanulmányozásakor fontos tudnimennyire hatékonyak az antibiotikumok.
Ez a bakteriológiai kutatási módszer általános jellemzője volt.
Az elemzés jellemzői
A bakteriológiai kutatás fő szabálya a maximális sterilitás. Ha kémcsövekkel dolgozik, akkor a baktériumtenyésztést és szubkultúrát csak fűtött spirituszlámpa felett szabad elvégezni.
A bakteriológiai kutatási módszer minden szakaszában speciális hurok vagy Pasteur pipetta használata szükséges. Mindkét szerszámot alkohollámpa lángjában kell előkezelni. Ami a Pasteur pipettát illeti, itt a termikus sterilizálás előtt csipesszel le kell törni a pipetta hegyét.
A baktériumok oltásának technikájának is megvannak a maga sajátosságai. Először is, amikor szilárd táptalajon oltjuk be, egy bakteriális hurkot engedünk át az agar felületén. A hurok felületén természetesen már mikroorganizmusmintának kell lennie. A táptalajba történő beoltást is gyakorolják, ebben az esetben a huroknak vagy pipettának el kell érnie a Petri-csésze alját.
A folyékony közeggel végzett munka során kémcsöveket használnak. Itt fontos ügyelni arra, hogy a folyadékok ne érjenek hozzá a laboratóriumi üvegedények vagy dugók széléhez, és a használt eszközök (pipetta, hurok) ne érjenek hozzá idegen tárgyakhoz és felületekhez.
A biológiai kutatási módszer fontossága
A baktériumminta elemzésének gyakorlati alkalmazásai vannak. Elsősorbanbakteriológiai kutatási módszer alkalmazható az orvostudományban. Például meg kell vizsgálni a beteg mikroflóráját a helyes diagnózis felállításához, valamint a megfelelő kezelési mód kidolgozásához. Itt segít egy antibiogram, amely megmutatja a gyógyszerek kórokozó elleni aktivitását.
A baktériumok laboratóriumi elemzését veszélyes betegségek, például tuberkulózis, visszaeső láz vagy gonorrhoea kimutatására használják. A mandulák, szervüregek bakteriális összetételének tanulmányozására is használják.
A bakteriológiai kutatási módszerrel megállapítható a környezet szennyezettsége. Az objektum felületéről készült kenet mennyiségi és minőségi összetételére vonatkozó adatok alapján meghatározzák a környezet mikroorganizmusok általi populációjának mértékét.
