Szinte minden fertőző betegség laboratóriumi diagnosztikája azon alapul, hogy szerológiai reakciók módszerével kimutatják a páciens vérében a kórokozó antigénjei ellen termelődő antitesteket. A tizenkilencedik század végétől a huszadik század elejéig léptek be az orvosi gyakorlatba.
A tudomány fejlődése segített meghatározni a mikrobák antigén szerkezetét és méreganyagaik kémiai képletét. Ez lehetővé tette nemcsak terápiás, hanem diagnosztikai szérumok létrehozását is. Ezeket úgy nyerik, hogy legyengített kórokozókat adnak be laboratóriumi állatoknak. Több napos expozíció után nyulak vagy egerek vérét használják fel a mikrobák vagy toxinjaik szerológiai vizsgálatokkal történő azonosítására szolgáló készítmények előállítására.
Az ilyen reakció külső megnyilvánulása a kialakulás körülményeitől és a páciens vérében lévő antigének állapotától függ. Ha a mikrobiális részecskék oldhatatlanok, kicsapódnak, lizálnak, megkötődnek vagy immobilizálódnak a szérumban. Ha az antigének oldhatóak, akkor megjelenik a semlegesítés vagy a kicsapódás jelensége.
Agglutinációs reakció (RA)
A szerológiai agglutinációs teszt nagyon specifikus. Könnyen kivitelezhető és elégvizuálisan, hogy gyorsan meghatározzuk az antigének jelenlétét a páciens vérszérumában. A Vidal-reakció (tífusz és paratífusz láz diagnózisa) és a Weigl (tífusz láz) vizsgálatára szolgál.
A humán antitestek (vagy agglutininek) és a mikrobiális sejtek (agglutenogének) közötti specifikus kölcsönhatáson alapul. Kölcsönhatásuk után részecskék képződnek, amelyek kicsapódnak. Ez pozitív jel. Élő vagy elölt mikrobiális anyagok, gombák, protozoonok, vérsejtek és szomatikus sejtek használhatók a reakció elindításához.
Kémiailag a reakció két lépésre oszlik:
- Az antitestek (AT) specifikus kapcsolata az antigénekkel (AG).
- Nem specifikus - AG-AT konglomerátumok kiválása, azaz agglutinát képződése.
Indirekt agglutinációs reakció (IPHA)
Ez a reakció érzékenyebb, mint az előző. Baktériumok, intracelluláris paraziták és protozoonok által okozott betegségek diagnosztizálására szolgál. Annyira specifikus, hogy még nagyon alacsony koncentrációjú antitestek is kimutathatók.
Tisztított birka eritrocitákat és antitestekkel vagy antigénekkel előkezelt emberi vörösvérsejteket használnak az előállításához (attól függően, hogy a laboratóriumi technikus mit akar találni). Egyes esetekben az emberi vörösvértesteket immunglobulinokkal kezelik. Az eritrociták szerológiai reakciói akkor tekinthetők megtörténtnek, ha a cső alján megtelepedtek. A pozitív reakciórólmondjuk, amikor a cellák fordított esernyő formájában vannak elrendezve, és elfoglalják az egész alját. Negatív reakciót számolunk, ha a vörösvértestek egy oszlopban vagy egy gomb formájában helyezkednek el az alsó rész közepén.
Kicsapódási reakció (RP)
Az ilyen típusú szerológiai reakciókat az antigének rendkívül kis részecskéinek kimutatására használják. Ezek lehetnek például fehérjék (vagy azok részei), fehérjék lipidekkel vagy szénhidrátokkal alkotott vegyületei, baktériumok részei, toxinjaik.
A reakcióhoz szükséges szérumot állatok, általában nyulak mesterséges megfertőzésével nyerik. Ezzel a módszerrel abszolút bármilyen kicsapó szérumot kaphat. A szerológiai precipitációs reakciók kialakulása hatásmechanizmusában hasonló az agglutinációs reakciókhoz. A szérumban lévő antitestek kolloid oldatban egyesülnek az antigénekkel, és nagy fehérjemolekulákat képeznek, amelyek a cső alján vagy a szubsztrátumon (gél) rakódnak le. Ez a módszer nagyon specifikusnak tekinthető, és akár elhanyagolható mennyiségű anyagot is képes kimutatni.
Pestis, tularémia, lépfene, agyhártyagyulladás és más betegségek diagnosztizálására használják. Emellett igazságügyi orvosszakértői vizsgálatban is részt vesz.
Gél kicsapódási reakció
A szerológiai reakciók nem csak folyékony közegben, hanem agar gélen is végrehajthatók. Ezt diffúz kicsapásos módszernek nevezik. Segítségével komplex antigénkeverékek összetételét tanulmányozzák. Ez a módszer az antigének antitestekkel szembeni kemotaxisán alapul, és fordítva. Gélben mozognakkülönböző sebességgel haladnak egymás felé, és találkozva csapadékvonalakat alkotnak. Minden sor egy AG-AT.
Exotoxin-semlegesítési reakció antitoxinnal (PH)
Az antitoxikus szérumok képesek semlegesíteni a mikroorganizmusok által termelt exotoxinok hatását. Ezek a szerológiai reakciók ezen alapulnak. A mikrobiológia ezt a módszert használja a szérumok, toxinok és toxoidok titrálására és terápiás aktivitásuk meghatározására. A toxinsemlegesítés erejét hagyományos mértékegységek határozzák meg - AE.
Ezenkívül ennek a reakciónak köszönhetően meghatározható az exotoxin fajtája vagy típusa. Ezt a tetanusz, diftéria, botulizmus diagnosztizálására használják. A vizsgálat „üvegen” és gélben is elvégezhető.
Lizisreakció (RL)
A páciens szervezetébe bekerülő immunszérum fő funkciója, a passzív immunitás mellett lizáló tulajdonságokkal is rendelkezik. Képes feloldani a mikrobiális ágenseket, sejtidegen elemeket, vírusokat, amelyek bejutnak a beteg szervezetébe. A szérumban lévő antitestek specifitásától függően bakteriolizineket, citolizineket, spirochetolizineket, hemolizineket és másokat izolálnak.
Ezeket a specifikus antitesteket "komplementnek" nevezik. Szinte minden emberi testnedvben megtalálható, összetett fehérjeszerkezetű, rendkívül érzékeny a hőmérséklet-emelkedésre, rázásra, savakra és közvetlen napfényre. De szárított állapotban képes megtartanilizáló tulajdonságai akár hat hónapig.
Vannak ilyen típusú szerológiai reakciók:
- bakteriolízis;
- hemolízis.
A bakteriolízist a páciens vérszérumával és élő mikrobákkal végzett specifikus immunszérummal végezzük. Ha elegendő komplement van jelen a vérben, akkor a kutató látni fogja, hogy a baktérium lizál, és a reakció pozitívnak minősül.
A vér második szerológiai reakciója, hogy a páciens vörösvérsejtjeinek szuszpenzióját hemolizineket tartalmazó szérummal kezelik, amelyek csak bizonyos bók jelenlétében aktiválódnak. Ha van ilyen, akkor a laboráns megfigyeli a vörösvértestek feloldódását. Ezt a reakciót széles körben alkalmazzák a modern gyógyászatban a komplement titerének meghatározására (vagyis annak legkisebb mennyiségére, amely vörösvértest-lízist vált ki) a vérszérumban, és a komplementkötés elemzésére. Ily módon történik a szifilisz szerológiai vizsgálata - a Wasserman-reakció.
Komlementrögzítési reakció (CFR)
Ez a reakció a fertőző ágens elleni antitestek kimutatására szolgál a páciens vérszérumában, valamint a kórokozó azonosítására antigén szerkezete alapján.
Eddig egyszerű szerológiai reakciókat írtunk le. Az RSK összetett reakciónak tekinthető, mivel nem két, hanem három elem lép kölcsönhatásba benne: antitest, antigén és komplement. Lényege abban rejlik, hogy az antitest és az antigén közötti kölcsönhatáscsak komplement fehérjék jelenlétében fordul elő, amelyek a képződött AG-AT komplex felületén adszorbeálódnak.
Maguk az antigének a komplement hozzáadása után jelentős változásokon mennek keresztül, ami a reakció minőségét mutatja. Ez lehet lízis, hemolízis, immobilizáció, baktericid vagy bakteriosztatikus hatás.
Maga a reakció két fázisban megy végbe:
- Antigén-antitest komplex képződése, amely nem látható a vizsgáló számára.
- Az antigén változása a komplement hatására. Ez a fázis leggyakrabban szabad szemmel követhető. Ha a reakció vizuálisan nem látható, akkor egy további jelzőrendszert használnak a változások azonosítására.
Jelzőrendszer
Ez a reakció a komplementkötésen alapul. Tisztított kos eritrocitákat és komplementmentes hemolitikus szérumot adunk a kémcsőbe egy órával az RSC beállítása után. Ha kötetlen komplement marad a kémcsőben, akkor az csatlakozik a birkavérsejtek és a hemolizin között képződő AG-AT komplexhez, és feloldódást okoz. Ez azt jelenti, hogy az RSK negatív. Ha az eritrociták sértetlenek maradtak, akkor ennek megfelelően a reakció pozitív.
Hemagglutinációs teszt (RGA)
Két alapvetően eltérő hemagglutinációs reakció létezik. Az egyik szerológiai, vércsoport meghatározására szolgál. Ebben az esetben a vörösvértestek kölcsönhatásba lépnek az antitestekkel.
És a másodika reakció nem vonatkozik a szerológiaira, mivel a vörösvérsejtek reagálnak a vírusok által termelt hemagglutininekkel. Mivel az egyes kórokozók csak meghatározott vörösvértestekre (csirke, bárány, majom) hatnak, ez a reakció nagyon specifikusnak tekinthető.
A kémcső alján lévő vérsejtek elhelyezkedése alapján megállapíthatja, hogy a reakció pozitív vagy negatív. Ha mintázata egy fordított esernyőhöz hasonlít, akkor a kívánt vírus jelen van a páciens vérében. És ha az összes eritrocita érmeoszlopként alakult ki, akkor nincsenek kívánt kórokozók.
Hemagglutinációs gátlási teszt (HITA)
Ez egy rendkívül specifikus reakció, amely lehetővé teszi a vírusok típusának, típusának vagy specifikus antitestek jelenlétének meghatározását a páciens vérszérumában.
Lényege abban rejlik, hogy a vizsgálati anyaggal együtt a kémcsőbe juttatott antitestek megakadályozzák az antigének lerakódását a vörösvértesteken, ezáltal megállítják a hemagglutinációt. Ez annak minőségi jele, hogy a vérben a keresett vírushoz tartozó specifikus antigének jelen vannak.
Immunfluoreszcens reakció (RIF)
A reakció azon a képességen alapul, hogy az AG-AT komplexeket fluoreszcens mikroszkóppal detektálják fluorokróm festékekkel való kezelés után. Ez a módszer könnyen kezelhető, nem igényli a tiszta kultúra izolálását és kevés időt vesz igénybe. Nélkülözhetetlen a fertőző betegségek gyors diagnosztizálásához.
A gyakorlatban ezek a szerológiai reakciók két típusra oszthatók: közvetlen és közvetett.
A közvetlen RIF előállítása ebből származikantigén, amelyet fluoreszcens szérummal előkezelnek. A közvetett pedig az, hogy először a gyógyszert hagyományos, a kérdéses antitestek antigénjeit tartalmazó diagnosztikával kezelik, majd az AG-AT komplex fehérjéire specifikus lumineszcens szérumot újra felviszik, és a mikrobiális sejteket. mikroszkóp alatt láthatóvá válik.
