Kolorimetriás módszer - a vizsgált és az ismert anyagok színtelítettségének összehasonlításán alapuló elemzés. A fizikai és kémiai vizsgálatok eredményei nagy értékűek a tudomány számos ága számára, de leginkább az orvostudományban hasznosítják a kutatást.
A kolorimetriás módszer lényege
Sokféle vizsgálat létezik, amelyek meghatározzák az anyagok kémiai összetételét. Némelyikük univerzális és széles körben használatos különféle területeken, mások specifikusak, nagyobb pontossággal. A kolorimetriás módszer univerzális.
Az elemzés lényege abban rejlik, hogy egy ismeretlen koncentrációjú oldat színtelítettségét összehasonlítjuk egy standard oldat színével. Az analízis során a vizsgált komponens egy bizonyos reagenssel való kölcsönhatása következtében színes vegyület képződik. A reakció befejeződése után a kapott árnyalatot összehasonlítjuk az oldatok színével, amelyek koncentrációja már ismert.
Úgy tartják, hogy a kolorimetria alapítója Robert Boyle. Squeeze-t használttanninok, amelyek megkülönböztetik a vasat az oldatban lévő réztől. Boyle volt az, aki észrevette, hogy minél nagyobb a vas koncentrációja az oldatban, annál gazdagabb az utóbbi tónusa.
Kolorimetria
A kolorimetria egy módszer az oldatokban lévő anyag mennyiségének meghatározására. Az elemzés a Bouguer-Lambert-Beer törvényen alapul: amikor egy fénysugár egy anyag sűrű elnyelő rétegébe ütközik, annak intenzitása gyengül.
Az anyag koncentrációjának meghatározására szolgáló kolorimetriás módszer vizuális összehasonlítást vagy összehasonlítást alkalmazhat speciális műszerekkel a színintenzitás mérésére. Az összehasonlítás közvetlen és kompenzációs módon történik.
- Egyenes. A módszer magában foglalja a vizsgálati oldat színszintjének összehasonlítását egy referenciaoldattal a folyadék bizonyos sűrűsége és hőmérséklete mellett. Fotokoloriméterek és spektrofotométerek használatakor referenciaoldatként desztillált vizet használunk. A készülékek az áram erősségét mérik, ami a fény intenzitásától függ.
- Kikompenzációs. A módszer azon alapul, hogy a vizsgált minta színét a referencia mintához hozzák. Az eredményt oldószer hozzáadásával vagy a festett közeg rétegének magasságának növelésével érjük el.
A spektrofotométer, monokromátor és más precíziós műszerek használata tovább egyszerűsíti az amúgy is egyszerű kutatási módszert, és lehetővé teszi az eredmények pontosságának növelését. Ezek az eszközök képesek mérni a fényáteresztés mértékét és meghatározni a hullámhosszt.
Ahol az elemzést alkalmazzák
A kolorimetriás elemzési módszert akkor alkalmazzuk, ha a pontos kémiai összetétel ismert, van referenciaminta az összehasonlításhoz, és a teszt és a referenciaminta hőmérséklete megegyezik. Ha gyorsan meg kell határoznia egy színes anyag mennyiségét, de az olyan kicsi, hogy lehetetlen az analitikai módszer alkalmazása.
A kolorimetriát széles körben használják az orvostudományban klinikai biokémiai kutatásokhoz és más területeken:
- gyógyszeripar;
- élelmiszer- és alkoholipar;
- agronómia (talajminőség meghatározása).
Érvek és hátrányok
A kolorimetriás módszernek, mint minden másnak, vannak előnyei és hátrányai.
Az előnyök a következők:
- könnyű elemzés, minimális előkészítési eljárások;
- tesztelési lehetőség kis mennyiségű vizsgálati anyaggal is;
- nincs szükség drága berendezésekre, bár az utóbbi időben egyre gyakrabban használnak modern eszközöket, amelyek nem olcsók. De ezek adják a legpontosabb eredményt.
Hátrányok: alacsony az elemzés pontossága az analitikai módszerekhez képest.
Biuret módszer a fehérjemeghatározáshoz
A vérszérumban lévő fehérje a homeosztázis állapotát tükrözi. A makromolekuláris vegyület koncentrációjának növekedését a vérben hiperproteinémiának, az alacsony koncentrációt hipoproteinémiának nevezik.
Fehérjék bennea vérszérum összetétele, szerkezete, tulajdonságai eltérőek, különböző funkciókat látnak el. Ezek enzimekre, hormonokra, immunglobulinokra és másokra vannak osztva. Minden fehérjecsoportnak számos közös jellemzője van, amelyek alapján biológiai folyadékokban lévő makromolekuláris szerves vegyületek meghatározására módszereket dolgoztak ki.
A klinikai biokémia valamennyi módszere közül a fehérje meghatározására leggyakrabban kolorimetriás módszereket alkalmaznak. Viszonylag olcsók, ami fontos a költségvetési szervezetek számára. és egészen egyszerűek. A legelterjedtebb a biuret módszer. A módszer lényege: a fehérjék lúgos környezetben reagálnak a réz-szulfáttal és lila színű vegyületeket képeznek. A vér fehérjetartalmát a festés telítettsége határozza meg. Az elemzéshez szükséges bioanyagot reggel éhgyomorra veszik.
Az elemzés nagyon pontos, de vannak olyan tényezők, amelyek befolyásolják a fehérje koncentrációját a vérben:
- fizikai aktivitás röviddel a bioanyag-mintavétel előtt;
- terhesség és szoptatás utolsó hetei;
- a Corticotropin, Miscleron, Clofibrate gyógyszerek alkalmazása növeli a vér fehérjetartalmát, a pirazinamid és az ösztrogén alkalmazása pedig a koncentráció csökkentésére;
- rossz kéztartás a bioanyag-mintavétel során.
A vas meghatározása
A vérben lévő vas mennyisége a különböző betegségek diagnosztizálásának egyik fő mutatója. Az anyag a hemoglobinban koncentrálódik, amely biztosítja az oxigén szállítását a szövetekbe. Mertvas meghatározása kolorimetriás módszerrel, leggyakrabban a batofenantrolin oldatát (0,02%) használják fő reagensként. Bioanyag - szérum hemolízis nyomai nélkül.
A módszer lényege: a vasionok és a szulfatált batofenantrolin kölcsönhatása színes komplexet képez, melynek telítettségét fotometriával határozzuk meg. A tiszta oldat eléréséhez be kell tartani a bioanyag mintavételi szabályait, de a vas-ligandum komplexek optikai sűrűségének pontos meghatározásához a vas hidroxil-amin és detergensek (nátrium-dodecil-szulfát) segítségével szabadul fel a hemoglobinból. A vizsgálat eredménye meghatározza a patológia jelenlétét és mértékét. A normál vaskoncentrációnak a következőnek kell lennie:
- 14, 2–26,0 mol/L (férfiak);
- 10, 6-21, 7 mol/L (nők).
A vashiány általában vérvesztéssel, nem megfelelő táplálékfelvétellel vagy a gyomor-bél traktusból való rossz felszívódással jár.
Koleszterin teszt
A koleszterin egy szerves anyag, amely számos szervezet sejtfalában található, beleértve az embereket is. A kolekalciferol és a szteroid hormonok termeléséhez szükséges. A 3,37-5,2 mmol/l koleszterinszint normálisnak tekinthető. A megnövekedett tartalom az érelmeszesedés egyik fő oka.
A koleszterinszint meghatározására szolgáló kolorimetriás módszerek lehetővé teszik az érrendszeri betegségek korai stádiumban történő felismerését. A patoanatómiai eredmények szerint az ischaemia letális kimenetele, a lipofil alkohol koncentrációja a betegekben6,5-7,8 mmol/l volt.
A kolorimetriás módszer elve az, hogy a koleszterint a 3béta-hidroxi-szteroid oxidoreduktáz oxidálja, hidrogén-peroxidot szabadítva fel, amely a p-aminoatipirint színes vegyületté alakítja. A koleszterin tartalmát a színének telítettsége határozza meg.
Gyermekeken végzett vizsgálat során figyelembe kell venni, hogy a gyermekkori koleszterinkoncentráció nem haladhatja meg a 4,1 mmol/l értéket.
Mi az enzimatikus kolorimetriás módszer?
Az enzimes tesztek nagy aktivitású enzimek reakcióin alapulnak. Széles körben használják az analitikai kémiában különféle anyagok meghatározására – a nitrátionoktól a makromolekulákig.
Az enzimatikus (enzimatikus) módszerek specifikusak, lehetővé téve bizonyos anyagok elemzését más, hasonló összetételű anyagok jelenlétében. A leggyakoribb módszerek, amelyek az enzim - glükóz-oxidáz - használatán alapulnak. A tesztet a vér glükózkoncentrációjának meghatározására használják. A teszt pontossága lehetővé teszi a hipoglikémiás szerek adagolásának beállítását 2-es típusú cukorbetegségben szenvedő betegeknél.
A glükóz oxidáló módszere az egyik legjobb kvantitatív módszer a glükóz meghatározására. A vér (kapilláris) és a szérum egyaránt használható bioanyagként, de a plazma előnyösebb, mert alacsonyabb a hematokrit tartalma, ami negatívan befolyásolja az eredmény pontosságát.
Főleg a fotometria kinetikus módszerét használják. A lényege abban rejlika glükóz-oxidáz és a peroxidáz megállapított aránya, a reakció megkezdése után egy bizonyos ideig a színes vegyület képződésének sebessége arányos lesz a mintában lévő glükóz szintjével. A teszt fő előnye, hogy az eredményt nem befolyásolja a külső vegyületek jelenléte a mintában. A módszernek van egy hátránya is - a vizsgálathoz drága német vagy svéd gyártók mérőműszerei szükségesek.
Következtetés
A kolorimetriás módszer pontos és könnyen használható. Az orvostudományban történő alkalmazása lehetővé teszi a szervezet különböző kóros elváltozásainak korai felismerését. Az új technológiák bevezetésével a módszer javul, és egyre népszerűbb.
